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《二师兄聊磁珠2》之磁珠法核酸纯化那点事儿13、全血基因组提取时为何会出现260:230比值偏低的情况?

发布日期:2018-11-29信息来源: 《二师兄聊磁珠2》磁珠法核酸提取那点事篇章点击率:

本集主讲

13、在使用大体积全血基因组核酸提取试剂盒时,红细胞裂解液和血样体积一定是精确到1:1?

试剂盒1.jpg

二师兄聊磁珠2

分析说明
磁珠法核酸提取那点事儿13

答案是不一定的。我们英芮诚自己的试剂盒,也不一定要求。以我们的外包提取服务来说,即便写了要求两者比例为1:1,也不尽然。我们知道加入红细胞裂解液是为了破碎红细胞,然后通过高速离心沉淀白细胞,再专门针对白细胞进行裂解。当我们处理大量样本时,每个血液样本的体积其实不是恒定的,不同试管的样本体积有可能相差几百微升乃至更多,很难精确测量,在处理大量样本时,不可能每个样本都去配置1:1 。我们做过大量的对比实验,建立红细胞裂解和血液样本体积比1:1 一直到2:1 的体积梯度,固定其它因素,最后得出结论,几乎没有区别。这个实践意义在于,处理大量样本时,如果血液样本体积在一定范围,可以批量(预)加入固定的红细胞裂解液。

话题延伸
磁珠法核酸提取那点事儿13

红细胞裂解液可不可以加入采血管里面,节省工作步骤和时间?答案是可以的。我们自己在做大体积的血液样本提取时(没有血凝块),直接在采血管加入1-2倍的红细胞裂解液,然后在自制的机器上进行涡旋裂解,让后用高速离心机收集白细胞,需要注意离心机和采血管是否匹配。我们自制的离心机可以适配,一次离心96个采血管,效率比较高。


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