全血基因组提取的清洗过程中磁珠没有完全分散均匀,影响结果么?
答案是基本上不影响。首先要了解磁珠法提取的过程,无论是便捷法试剂盒还是外部裂解法试剂盒,在样本粗提取步骤中,磁珠结合了大量的核酸之后,它同时还会吸附样本中的其它裂解产物,也有DNA本身结合的蛋白,会表现出一定黏性。通过磁棒转移磁珠时,会把吸附的杂质一起转出。通常还需要清洗3-4次,通过清洗液中的成分,讲杂质和蛋白洗去。清洗动作是通过磁棒套上下机械振动,来将磁珠分散开。粗提取的杂质也会被机械运动震开,第一步的清洗会洗去大量杂质。但是这个步骤中磁珠没有分散均匀有两种情况,第一种情况是,提取的核酸和杂质结成团沉在底部;第二种情况是被磁棒震开了,成絮状物。第一种情况是清洗不干净的,后者是可以的。只要提取物能分开而不是黏成一团沉底,就不用担心清洗不干净。那么如果遇到第一种情况应该怎么办呢,应该找仪器的厂家调整参数,让磁棒下落过程尽可能接近96孔板底部(不能触底),冲击开团聚物。当第一步清洗能分散开,后续的清洗基本上都能比较干净。如果团聚物现象比较多,建议适当增加清洗时间,好比洗衣服原理。只要没有成团现象,基本上都会清洗干净。