在做200ul全血基因组提取时,样本中有少量的血凝块,可以用仪器内部裂解版的试剂盒吗?
答案是不建议的。首先,磁珠法内部裂解的试剂盒采用的是边裂解边结合的技术,在仪器上,全血加入相应的孔位,边加热边裂解。如果有少量血凝块,会形成一团,其裂解速度远远慢于常规血液。转入的磁珠,会被粘附在血凝块表面或被包裹住,导致两个问题产生,一是磁珠结合能力被抑制,其吸附DNA能力变弱,二是磁棒转移磁珠时,会带着血凝块转移到下一个孔位,乃至再下一个孔位,其在转移过程中,随时存在掉落的风险,若是掉入孔中间,通常该样本可能需要复提,若正好掉落在孔壁上,血凝块可能会溅开,造成邻位样本污染。所以,针对有血凝块的全血样本,不建议直接使用内部裂解版的试剂盒。如果仅有这一款试剂盒,不得不使用,那么建议首先将样本放在Vortex上高速涡旋振荡,目的是把底部白细胞涡旋起来,然后用黄枪头(不可使用蓝枪头,因血凝块能通过蓝枪头的吸嘴)沿着试管边缘,吸取150-180ul的血样加入到深孔板相应的孔位上机运行。以上,是使用仪器内部裂解版的试剂盒在处理有少量血凝块样本时的处理方法,谢谢大家。