200uL全血基因组提取时，样本中有少许血凝块，一定要过液化柱吗？

      根据我们英芮诚长期做核酸提取外包服务的经验，我们认为是不必要的，就是说不一定非要过液化柱。

      但是呢，话讲回来，不过液化柱，并不是说对于全血里少许的血凝块熟视无睹，因为存在血凝块会带来几个问题：

第一会导致我们取血不均匀；

第二会导致裂解不均匀；

第三在提取过程中会导致磁珠缠牢在没有裂解好的血凝块上面，导致提取的不均匀。

      这样会出来的数据OD值偏低，另外260/280纯度比较差。既然存在少于血凝块的时候会出现后续的这些问题，为什么可以不用过液化柱呢？其实我们有一个量的概念，也就是说，如果我们血凝块不是太多的时候，我们在取血的时候只要能够把这些血凝块能够把它打碎掉，那么就OK了。

      我教给大家一个比较方便的办法，我们一般用的黄枪头（200uL取血），将枪头的前段剪短（剪取3mm-5mm的距离），让枪头孔变大，减的时候尽量稍微倾斜一点点，不要垂直的剪，用移液枪插上被剪过的枪头在血样里反复的吹打。靠被剪过的枪头的剪切力使血凝块尽量的分散开、分散均匀，取样的时候，换一个其他的黄枪头来进行取样，保证我们取样的均匀，这个时候用黄枪头来取样，最好也是把枪头剪掉一点点，因为我们的黄枪头孔可能太小，这样我们在取样的时候会有一点点血凝块堵塞枪头，血样吸不进去（一种情况是吸不动，一种情况是血凝块较软，堵塞因为吸力慢慢往里进，突然一下，血样会喷到枪体里，会污染枪）。

      刚才我们介绍有血凝块会导致取样不均匀、裂解不均匀、OD值会变差，如果说这里面有少许血凝块，刚才通过剪枪头的方式能够把这个血取的比较均匀的时候，那么后续裂解的时候，建议大家裂解液稍微多加一点点（像我们的试剂盒，200uL血加200uL裂解液，为1：1的关系，应为有少许血凝块的关系，200uL的血可以加220-250uL的裂解液，多加几十微升），在裂解的时候还要注意个问题，如果我们裂解的不充分，会导致后面的OD值变差，所以裂解的时候要有振荡，振荡有两种方式来解决。

第一种，如果我们实验室没有其他辅助设备，裂解还是靠水浴锅或者金属浴来裂解，第一裂解的时间稍微延长一点，比试剂盒上约定的时间延长15-20min，这样有助于血凝块的裂解；

第二非常重要，就是在加热裂解的过程中一定要振荡涡旋一下（5-10min取出，涡旋1min），让血凝块和裂解体系快速的分散开，否则会导致裂解不充分。最好的方式是英芮诚有一款‘96孔板专用振荡裂解仪’，我们选择在96孔板上或者放置在EP管里，它是在一个恒定的温度下边振荡边裂解，这样整个过程第一可以缩短时间，第二保持裂解的过程很均匀、柔和。涡旋振荡加热，提供58℃-60℃的恒定温度，蛋白酶效率高。

这就是我们讲到说血液里有少许的血凝块，第一在取血过程中要把枪头剪掉一点，反复的吹打，使血凝块尽量的分散开，然后再用减掉头的黄枪头进行取样；第二裂解的时候要多加一点裂解液，多增加裂解时间；第三非常重要，裂解过程中一定不要把它放在水浴锅或者常规金属浴上不去管它，一定要在裂解过程中每隔5-10min涡旋一下（涡旋速度可以稍微快一点，1min左右，不会导致全血基因组降解）。